流式细胞术原理

特定波长的激光束直接照射到高压驱动的液流内的细胞，产生的光信号被多个接收器所接收，包括激光束直线方向上接收到的散射光信号（前向角散射）和激光束垂直方向上接收到的光信号（散射光信号（侧向角散射）和荧光信号）。液流中悬浮的直径从0.2-150 μm的细胞或颗粒能够使激光束发生散射，细胞上结合的荧光化合物被激光激发后能够发射荧光。散射光信号和荧光信号被相应的接收器接收，根据接受到的信号的强弱从而反映每个细胞的物理学特征。

分析型流式细胞仪检测原理

将待测样品制成单细胞悬液，在鞘液的包裹下进入流式细胞仪内的检测区域，细胞在激光的照射下会发生散射和折射，产生的散射光信号和荧光信号由不同的通道接收。其中前向角散射光（FSC）的强度与细胞直径成正相关，可以理解为细胞直径越大，FSC越强，细胞直径越小，FSC越弱。所以可以利用细胞的FSC值初步比较细胞的大小，利用FSC值对细胞进行分群和分类。  

上海医疗器械博览会Medtec将在现场同期举办技术论坛E：医疗器械诞生的助推器——创新医用材料/配件及精加工论坛，本次会议将结合生物医用材料、精密配件及生产中精密的加工工艺在医疗器械中的应用为器械生产商和供应商提供交流平台。现在预登记参观参会限时免费>>>

侧向角散射光（SSC）的强度与细胞内颗粒结构复杂程度成正相关（与细胞中所含的细胞器、细胞核等的数量成正比），可以理解为细胞内颗粒结构越复杂，SSC越强；细胞内颗粒结构越简单，SSC越弱。所以可以利用细胞的SSC值初步比较细胞的颗粒度，利用SSC值对细胞进行分群和分类。

当细胞通过激光束时，检测器会检测到细胞或颗粒的散射光，放置在前面的检测器检测FSC值，而放置在侧面的多个检测器检测SSC值。通过综合分析前向散射FSC和侧向散射SSC的数据，便能根据细胞大小、形状和复杂度将其进行分群分类。由于样品细胞不需要标记任何荧光化合物偶联抗体，直接上样分析得到FSC值和SSC值，其值代表细胞的大小和颗粒度两个物理特征，所以FSC-SSC散点图又称为 “物理图”。

分析型流式细胞仪检测原理

当细胞悬液放入样品管中，被高压压入流动室内。流动室内充满鞘液，在鞘液的包裹和推动下，细胞被排成单列，以一定速度从流动室喷口喷出。在流动室的喷口上配有一个超高频的压电晶体，充电后振动，使喷出的液流断裂为均匀的液滴，待测细胞就分散在这些液滴之中。将这些液滴充以正、负不同的电荷，当液滴流经过带有几千伏的偏转板时，在高压电场的作用下偏转落入各自的收集容器中，没有充电的液滴落入中间的废液容器，从而实现细胞的分离。流式细胞仪除了根据FSC和SCC散射度或荧光(如DNA、RNA或蛋白含量，酶活性，特异抗原) 散射度差异来分离细胞外，更多的采用细胞表面抗原标记的荧光强度差异来分离细胞。每种细胞表面具有独特的抗原，当形态学检测难以区别时，免疫表型参数对细胞分选有决定性作用。

流式细胞术结果

荧光信号和散射光信号通过波长选择的滤光片，由相应的光电管和电子检测器接收并转换成电信号，经放大器放大后送入计算机并进行分析显示和结果输出，测定的结果常用流式直方图、流式散点图、流式密度图和流式等高线图来表示。

流式细胞术样本类型

流式细胞仪可检测多种样本：外周血、骨髓、细胞穿刺液、洗脱液、实体组织、培养细胞、微生物。

上海医疗器械博览会Medtec总结流式细胞术应用

1.流式细胞术可以用来检测细胞表面以及胞内的各种标志，对细胞进行分群鉴定以及各种蛋白表达量高低的比较。

2.通过标记Ki67、BCL-2、caspases等增殖及凋亡相关基因，流式细胞术可用来检测细胞的增殖以及凋亡。

3.流式细胞术可用来分析细胞周期。细胞核DNA含量随着细胞增殖周期时相的不同而发生变化，用DNA染料进行染色，DNA含量多，荧光信号强，DNA含量少，荧光强度低。

4.在肿瘤学研究中尤其常用，流式细胞术可以用于判断药物对肿瘤细胞影响、肿瘤的生长速度等。

文章来源：IVD工具人